• John Winchester ( Jeffrey Dean Morgan ) ::
John est le père des deux frères Winchester. C'est un homme déterminé; il a formé Dean et Sam, pendant leur jeunesse, à devenir des chasseurs comme lui. Son recueil de notes les guide dans leurs chasses.
• Mary Winchester ( Samantha Smith ) ::
Mary Winchester est la défunte épouse de John. C'est la mère de Sam et Dean; elle est assassinée par le démon Azazel alors qu'ils étaient encore enfants.
• Bobby Singer ( Jim Beaver ) ::
Bobby est un ami de John Winchester. Il est en fait un ami fidèle qui les aidera dans bien des épreuves contre les forces du mal, notamment après la mort de leur père.
• Ruby ( Katie Cassidy ) ::
Ruby est un démon; elle semble être déterminée à aider les deux frères dans leur lutte contre les forces du mal. Mais quel est son but réel ? Dean et Sam peuvent-ils vraiment lui faire confiance ?
• Bela Talbot ( Lauren Cohan ) ::
Bela Talbot est une jeune femme splendide qui cache un personnage peu fréquentable, cynique et intéressée, puisqu'elle est une chasseuse d'objets surnaturels et qu'elle est prête à tout pour les obtenir.
• Ellen Harvelle ( Samantha Ferris ) ::
Ellen Harvelle est une vieille connaissance de John. Veuve d'un chasseur, elle est la mère de Jo et Ash. Elle tient le Harvelle's Roadhouse, un saloon, véritable repère de chasseurs.
• Jo Harvelle ( Alona Tal ) ::
Jo est la fille d'Ellen. Bien que jeune, c'est une femme forte et bien déterminée à devenir un jour chasseuse.
• Ash Harvelle ( Chad Lindberg ) ::
Ash est le fils d'Ellen. Doué en informatique, il aidera Dean et Sam dans certaines de leurs chasses. Sérieux lorsqu'il s'agit de travailler mais aussi fêtard.
• Azazel ( Fredric Lehne ) ::
Souvent appelé le "démon aux yeux jaunes", Azazel est un démon puissant qui est à l'origine de la mort de Mary Winchester et de celle de Jessica, la petite amie de Sam.
• Meg Masters ( Nicki Lynn Aycox ) ::
Meg est une jeune femme que Sam a rencontré en faisant de l'auto-stop. Ils se lient d'amitié, mais celle-ci se révèle être possédée par une entité démoniaque et devient alors l'ennemie des frères Winchester.
• Gordon Walker ( Sterling K. Brown ) ::
Gordon a vu sa petite soeur se faire attaquer par un vampire alors qu'il avait 18 ans. Depuis il est devenu un redoutable chasseur de vampires, complètement fanatique et sans pitié.
• Lilith ( Rachel Pattee ) ::
Lilith est un démon majeur qui en a après Sam, qu'elle juge être un véritable rival à son hégémonie. Apparaissant sous les traits d'une fillette innocente, elle est en fait extrêmement puissante et maléfique.
• M. Winchester ( Mitch Pileggi ) ::
L'acteur Mitch Pileggi jouera le père de Mary Winchester, lors des flashbacks sur la vie d'adolescents de John et Mary. C'est donc le grand-père de Dean et Sam.
• Castiello ( Misha Collins ) ::
Castiello (ou Castiel) est celui qui a sauvé Dean de l'enfer, en lui laissant sa marque à l'épaule. C'est un ange, guerrier du Seigneur, envoyé sur terre par Dieu lui-même pour empêcher la venue de Lucifer.